人胎盤生長因子ELISA 檢測試劑盒　　　　　　　　　　　　

本試劑僅供研究使用  標本：血清或血漿

試驗原理：
　　　　PLGF試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知PLGF濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將PLGF和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中PLGF的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人胎盤生長因子ELISA 檢測試劑盒

操作注意事項
試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

人胎盤生長因子ELISA 檢測試劑盒

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與人其它細胞因子反應(yīng)。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

人胎盤生長因子ELISA 檢測試劑盒

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應(yīng)的PLGF標準品濃度為橫坐標（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的PLGF含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出濃度。

3、檢測值范圍：0-80ng/ml

4、敏感度： 0.1 ng/ml

b-Cyclodextrin, hydrate b-環(huán)糊精 [7585-39-9] 25g
γ-Cyclodextrin, hydrate γ-環(huán) 糊 精 [17465-86-0] 5g
γ-Cyclodextrin, hydrate γ-環(huán) 糊 精 [17465-86-0] 25g
γ-Cyclodextrin, hydrate γ-環(huán) 糊 精 [17465-86-0] 250mg
Cyclohexane 環(huán)己烷; 六氫化苯 [110-82-7] 500ml
1,1-Cyclohexanediacetic acid 1,1-環(huán)己基二乙酸 [4355-11-7] 50g
1,1-Cyclohexanediacetic acid monoamide 1-環(huán)己基二乙酸單酰胺 [99189-60-3] 50g
1,2-Cyclohexanediaminetetraacetic acis 反式-1，2-環(huán)己二胺四乙酸 [13291-61-7] 50g
1,3-Cyclohexanedione 1,3-環(huán)己二酮 [504-02-9] 500g
1,4-Cyclohexanedione 1,4-環(huán)己二酮 [637-88-7] 100g
Cyclohexanol 環(huán)己醇 [108-93-0] 250ml
Cyclohexanone 環(huán)己酮 [108-94-1] 250ml
Cyclohexanone oxime 環(huán)己酮肟 [100-64-1] 100g
Cyclohexanone peroxide 過氧化環(huán)己酮 [12262-58-7] 100g
Cyclohexylamine 環(huán)己胺 [108-91-8] 500ml
Cyclopentanone 環(huán)戊酮 [120-92-3] 500ml
2-Cyclopenten-1-one 2-環(huán)戊烯酮; 2-環(huán)戊烯-1-酮 [930-30-3] 500ml
Cyclosporin A 環(huán)胞霉素A [59865-13-3] 250mg
Cyclosporin A 環(huán)胞霉素A [59865-13-3] 1g
Cyclosporin A 環(huán)胞霉素A [59865-13-3] 5g
Cysteamine hydrochloride 半胱胺鹽酸鹽 [156-57-0] 5g
DL-Cysteine DL-半胱氨酸 [3374-22-9] 100g
L-Cysteine L-半胱氨酸 [52-90-4] 100g
L-Cysteine L-半胱氨酸 [52-90-4] 500g
DL-Cysteine, hydrochloride, monohydrate DL-半胱氨酸鹽酸鹽一水 [10318-18-0] 100g
L-Cysteine hydrochloride, monohydrate L-半胱氨酸酸鹽一水 [7048-04-6] 100g
L-Cysteine hydrochloride, monohydrate L-半胱氨酸酸鹽一水 [7048-04-6] 500g
L-Cysteine hydrochloride, monohydrate L-半胱氨酸酸鹽一水 [7048-04-6] 25g
DTPA-Na5 40% solution 五醋三胺鈉溶液 [140-01-2] 500ml
L-Cysteine hydrochloride, monohydrate L-半胱氨酸酸鹽一水 [7048-04-6] 100g
DL-Cystine DL-胱氨酸 [923-32-0] 100g
L-Cystine L-胱氨酸 [56-89-3] 100g
L-Cystine L-胱氨酸 [56-89-3] 500g
Cytidine 胞嘧啶核苷 [65-46-3] 25g
Cytidine 胞嘧啶核苷 [65-46-3] 100g
CDP sodium salt, hydrate; Cytidine 5′-diphosphate sodium salt, hydrate 胞苷-5’-磷酸三鈉鹽 [34393-59-4] 100mg
CDP sodium salt, hydrate; Cytidine 5′-diphosphate sodium salt, hydrate 胞苷-5’-磷酸三鈉鹽 [34393-59-4] 500mg