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膠體金檢測

2011/3/22 [1226]

膠體金是一種常用的標記技術(shù),是以膠體金作為示蹤標志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術(shù),有其*的優(yōu)點。近年已在各種生物學研究中廣泛使用。在臨床使用的免疫印跡技術(shù)幾乎都使用其標記。同時在流式、電鏡、免疫、分子生物學以至生物芯片中都可能例用到。   1971年Faulk 和Taytor將膠體金引入免疫化學,此后免疫膠體金技術(shù)作為一種新的免疫學方法,在生物醫(yī)學各領(lǐng)域得到了日益廣泛的應(yīng)用。目前在醫(yī)學檢驗中的應(yīng)用主要是免疫層析法(immunochromatogra-phy)和快速免疫金滲濾法(Dot-immuogold filtration assay DIGFA),用于檢測 HBsAg、HCG 和抗雙鏈DNA抗體等,具有簡單、快速、準確和無污染等優(yōu)點。   免疫膠體金技術(shù)的基本原理:   膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金顆粒,并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài),形成帶負電的疏水膠溶液,由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài),故稱膠體金。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負電荷,可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團形成牢固的結(jié)合,由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合,所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。   膠體金除了與蛋白質(zhì)結(jié)合以外,還可以與許多其它生物大分子結(jié)合,如SPA、PHA、ConA等。根據(jù)膠體金的一些物理性狀,如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng),加上結(jié)合物的免疫和生物學特性,因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領(lǐng)域。   膠體金標記,實質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面負電荷,與蛋白質(zhì)的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結(jié)合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對蛋白質(zhì)有很強的吸附功能,可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結(jié)合,因而在基礎(chǔ)研究和臨床實驗中成為非常有用的工具。   免疫金標記技術(shù)(Immunogold labelling techique) 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性,在金標蛋白結(jié)合處,在顯微鏡下可見黑褐色顆粒,當這些標記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時,肉眼可見紅色或粉紅色斑點,因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中,這一反應(yīng)也可以通過銀顆粒的沉積被放大,稱之為免疫金銀染色。   常用的免疫膠體金檢測技術(shù):   (1)免疫膠體金光鏡染色法   細胞懸液涂片或組織切片,可用膠體金標記的抗體進行染色,也可在膠體金標記的基礎(chǔ)上,以銀顯影液增強標記,使被還原的銀原子沉積于已標記的金顆粒表面,可明顯增強膠體金標記的敏感性。   (2)免疫膠體金電鏡染色法   可用膠體金標記的抗體或抗抗體與負染病毒樣本或組織超薄切片結(jié)合,然后進行負染。可用于病毒形態(tài)的觀察和病毒檢測。   斑點免疫金滲濾法   (3)應(yīng)用微孔濾膜(如膜)作載體,先將抗原或抗體點于膜上,封閉后加待檢樣本,洗滌后用膠體金標記的抗體檢測相應(yīng)的抗原或抗體。   (4)膠體金免疫層析法   將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上,膠體金標記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結(jié)合墊上,當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后,通過毛細作用向前移動,溶解結(jié)合墊上的膠體金標記試劑后相互反應(yīng),再移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時,待檢物與金標試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留,聚集在檢測帶上,可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條,使用十分方便。   快速金標試劑技術(shù)是將特異的抗體先固定于酸類纖維素膜的某一區(qū)帶,當該干燥的酸類纖維素一端浸入樣品(尿液或血清)后,由于毛細管作用,樣品將沿著該膜向前移動,當移動至固定有抗體的區(qū)域時,樣品中相應(yīng)的抗原即與該抗體發(fā)生特異性結(jié)合。同時利用金粒具有高電子密度的特性,在金標蛋白結(jié)合處。當這些標記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時,肉眼可見紅色的斑點。既為快速的金標檢測方法原理。生產(chǎn)快速而試劑,要點在于所采用的單克隆抗體、多元克隆抗體、抗原、半抗原、蛋白嵌合物及膠體金等原料的靈敏性及特異性等是否能達到zui高的標準,此為金標試劑的質(zhì)量之zui重要的標準。

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